真菌的微生物学检查法课件ppt

主讲人：范国权

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第三十六章   真   菌

是一大类具有细胞壁和典型细胞核、不含叶绿素、不分根、茎、叶的真核细胞型微生物。细胞分化程度高，细胞器完整，大部分为多细胞，少数为单细胞结构，分布广、种类多，多数无害，有的有益，少数有害，引起感染、中毒、超敏反应。

与医学有关的有4个亚门

1、接合菌亚门：机会致病性真菌，如毛霉菌、     

                              根霉菌

2、子囊菌亚门：如芽生菌属、组织胞浆菌属、

                              毛癣菌属、酵母菌属

3、担子菌亚门：食用菌如蘑菇、灵芝、新生隐 

                              球菌

4、半知菌亚门：球孢子菌属、白假丝酵母菌

接合菌（Zygomycotina）

子囊菌亚门（Ascomycotina）

担子菌（Basidiomycotina）

半知菌（Deutemycotina）

一、真菌的形态与结构

形态多种多样，大小不一。比细菌大的多。小的如白假丝酵母菌，大的如蘑菇、木耳。

（一）单细胞真菌

1、酵母型～：由母细胞以芽生方式繁殖， 菌落似细菌，细胞圆形、椭圆形、圆柱形。5～30µm×3～5µm。

2、类酵母菌～：芽生方式繁殖，可形成假菌丝。

单细胞真菌

呈圆形或椭圆形，不产生

菌丝，有假菌丝联结在一

起的假菌丝体

（二）多细胞真菌

1、菌丝：孢子出芽形成芽管，延长呈丝状即菌丝，横径约5～6 µm，长出分枝，交织成团形成菌丝体。

有隔菌丝/无隔菌丝:病原性真菌多为有隔菌丝。

营养菌丝：长入培养基中的菌丝。

气中（生）菌丝：露出培养基表面的菌丝。其中可以产生孢子的菌丝称为生殖菌丝。

2、孢子（spore）

真菌的生殖结构，由生殖菌丝生成。大多数真菌通过有性或无性孢子繁殖。病原性真菌多产生无性孢子。

（1）叶状孢子：菌丝直接形成。

          芽生孢子

            关节孢子

            厚膜孢子

（2）分生孢子：菌丝或其分枝后的结构顶端或侧面直接形成。

         大分生孢子

          小分生孢子

（3）孢子囊孢子：菌丝末端形成孢子囊，内有许多孢子。孢子成熟后则破囊而出，如毛霉菌、根霉菌。

1）无性孢子

（1）叶状孢子：菌丝直接形成。

          芽生孢子

          关节孢子

          厚膜孢子

（2）分生孢子：菌丝或其分枝后的结构顶端或侧面直接形成。         大分生孢子          小分生孢子

（3）孢子囊孢子：菌丝末端形成孢子囊，内有许多孢子。孢子成熟后则破囊而出，如毛霉菌、根霉菌。

2）有性孢子

是由细胞间配合（质配和核配）后产生的孢子，有接合孢子、子囊孢子、担子孢子。有性孢子绝大多数为非致病性真菌所具有。

多细胞真菌

菌丝（hypha）

孢子（Spore）

真菌无性孢子的形态

二、真菌的培养

（一）真菌的繁殖方式   无性生殖、有性生殖。无性生殖是指不经过两性细胞的结合便产生新的个体。无性繁殖是真菌的主要繁殖方式。

（二）真菌的培养

培养特点：低营养、低温度（浅部）22-28℃、低PH(4.0-6.0)、高湿度和氧            “三低两高”

（二）真菌的培养

1.最常用的培养

沙保弱培养基（Sabouraud‘s glucose agar）

4% malt extract agar

2.温度

多数都在22 ~ 28oC，但深部感染真菌最适温度为37oC

3.酸碱度：pH4.0 ~ 6.0

4.病原菌通常生长缓慢，1~4周

沙保弱培养基成分：

    葡萄糖              20g

    蛋白胨              5g

    琼脂                  10g

    蒸馏水              500ml

5.三种菌落

酵母型：单细胞菌落，有芽生孢子，无菌丝。

类酵母型菌落：可见假菌丝。

丝状型菌落：多细胞真菌。

真菌菌落的形态、结构和颜色可作为鉴定真菌的参考

真菌菌落

酵母型菌落（yeast colony） 

菌落光滑、湿润。无菌丝

隐球菌菌落

类酵母型菌落（yeast-like colony） 

外观和酵母型菌落相似，显微镜下可看到假菌丝

白色念株菌菌落

丝状型菌落（filamentous colony）

菌落系由多细胞菌丝体所组成

大多数丝状真菌或霉菌的菌落

三、变异性与抵抗力

对干燥、阳光、紫外线及常用消毒剂有强抵抗力

不耐热，菌丝与孢子60℃ 1小时均可被杀死

对2﹪石炭酸、10%甲醛、0.1%升汞和2.5%碘酊敏感

对常用于抗细菌的抗生素不敏感

灰黄霉素、制霉菌素B、二性霉素B、氟康唑和酮康唑等抗真菌药物对多种真菌均有抑制作用

不同的真菌可通过下列几种形式致病：　　1.致病性真菌感染。 　　2.条件致病性真菌感染 。　　3.真菌超敏反应性疾病。 　　4.真菌性中毒症 。　　5.真菌毒素与肿瘤的关系。

一、真菌致病性

2、条件致病性真菌感染：内源性真菌感染致病性弱，只有在机体免疫力降低时引起感染

内源性真菌感染多见于长期大量使用广谱抗生素、皮质激素、放疗或导管介入、手术等过程易于发生

肿瘤、白血病、糖尿病、免疫缺陷病

第三节   真菌的微生物学检查法

标本

    浅部感染真菌         毛发、皮屑、指甲

     深部感染真菌          痰、血液、脑脊液等

直接镜检：

浅部标本---KOH处理后镜检

假丝酵母菌---革兰染色（假菌丝、厚膜孢子）

隐球菌---墨汁负染（厚荚膜）

其他多细胞真菌----特殊染色镜检

分离培养

血清学检查

核酸检测

小结：真菌与细菌的比较

第37章 主要病原性真菌

真菌按其侵犯的部位和临床表现，可分为浅部感染真菌、深部感染真菌和条件致病性真菌。

第一节 浅部感染真菌

一、表面感染真菌　　 这类真菌主要寄居于人体皮肤和毛干的最表层。因不接触组织细胞，很少引起宿主细胞反应。这类真菌在我国主要有秕糠马拉癣菌(Malasseziafurfur)，可引起皮肤表面出现黄褐色的花斑癣，如汗渍斑点，俗称汗斑。此菌具嗜脂性。有报道从92%正常人头皮、躯干、面部、四肢等部位分离出。诱发因素为高温多汗。由于此菌能产生对黑色素细胞有抑制作用的二羧酸，使花斑癣局部色素减退。此菌有粗短、分枝的有隔菌丝和成丛的酵母样细胞。患者皮肤用Wood灯紫外线波长365nm照射或刮取鳞屑照射，能发出金黄色荧光，有助于诊断。

二、皮肤癣真菌 

引起皮肤浅部感染的真菌主要是一些皮肤癣菌(dermatophytes)。皮肤癣菌有嗜角质蛋白的特性，使其侵犯部位只限于角化的表皮、毛发和指（趾）甲，而病理变化是由真菌的增殖及其代谢产物剌激宿主引起的反应。皮肤癣，特别是手足癣是人类最多见的真菌病。皮肤癣菌分毛癣菌(Tricho-phyton)、表皮癣菌（Epidermophyton)和小孢子癣菌(Microsporum)3个属。

（一）生物学性状　

    　皮肤癣菌可在沙保培养基上生长，形成丝状菌落。根据菌落形态、颜色和所产生的大分生孢子，可对皮肤癣菌作出初步鉴定 

（二）皮肤癣真菌的致病性

一种皮肤癣菌可在不同部位引起病变，相同部位的病变也可由不同的皮肤癣菌引起。3种癣菌均可侵犯皮肤，引起手足癣、体癣、股癣、叠瓦癣等。毛癣菌和表皮癣菌可侵犯指（趾）甲，引起甲癣（俗称灰指甲），使指甲失去光泽，增厚变形。此外，毛癣菌与小孢子癣菌还可侵犯毛发，引起头癣、黄癣和须癣

三、皮下组织真菌感染 

引起皮下组织感染的真菌主要有着色真菌和孢子丝菌。感染常发生于真菌侵入的外伤部位。感染最初发生于真皮深层、皮下组织或骨，逐渐扩展，最后可达到皮表下。感染一般只限于局部，但也可缓慢扩散至周围组织。 

（一）孢子丝菌

孢子丝菌属于腐生性真菌，广泛存在于土壤、植物、木材上，常因外伤接触带菌的花草、荆棘等引起感染。感染的主要病原为申克孢子丝菌 。

孢子丝菌致病性

致病性：

1.孢子丝菌可经微小损伤侵入皮肤，然后沿淋巴管分布，引起亚急性或慢性肉芽肿，使淋巴管形成链状硬结，称为孢子丝菌下疳。

2.此菌也可经口进入肠道或经呼吸道进入肺，随后经血行播散至其他器官引起深部感染。

（二）着色真菌 

是一些在分类上接近、引起的疾病症状近似的真菌的总称。感染都发生在暴露部位，病损皮肤变黑，故称着色真菌病(chromomycosis)。

在我国主要有卡氏枝孢霉和裴氏着色芽生菌 

着色真菌的分生孢子有3型：①树枝型；②剑顶型；③花瓶型。 

着色真菌致病性

在人体主要侵犯肢体皮肤。潜伏期约一个多月，长者数月乃至1年。病程可长达几十年。早期皮肤患处发生丘疹，丘疹增大形成结节，结节融合成疣状或菜花状。随病情发展，原病灶结疤愈合，新灶又在四周产生。日久疤痕广泛，影响淋巴回流，形成肢体象皮肿。免疫功能低下时亦可侵犯中枢神经，或经血行扩散。

三、地方性流行真菌

这些真菌均属二相性，对环境温度敏感。一般在体内或37℃培养时呈酵母型，在室温下人工培养变为丝状型。

1.荚膜组织胞浆菌 

2. 厌酷球孢子菌 

3. 皮炎芽生菌

1.荚膜组织胞浆菌(Histoplasmacapsulatum)　　标本在油镜下检查可见单核细胞或中性粒细胞中有圆形或卵圆形的酵母型细胞（直径1~5μm)。以出芽繁殖，四周有不着色的荚膜样物质。在沙保培养基上室温下生长缓慢，形成白色棉絮样菌落，逐渐从黄色转变为褐色。镜检可见细长有隔菌丝，在菌丝侧面或孢子柄上长有特殊的圆形大分生孢子(8~15μm)，厚壁，四周有棘突，排列如齿轮，这种孢子有诊断价值。

2.厌酷球孢子菌：镜检可见有较大的厚壁球孢子(20~80μm)，内含许多内生孢子(2~6μm)，厚壁破裂则内生孢子逸出。在沙保培养基上生长迅速，开始为白色菌落，很快变为棕黄色棉絮样菌落。镜下见有大量关节孢子。

3.皮炎芽生菌：镜下可见细胞呈酵母型，均以出芽繁殖。二者的区别是皮炎芽生菌每1个细胞仅出1个芽， 

第二节  深部真菌感染

       条件致病性真菌感染多为内源性，如假丝酵母菌病和曲霉病等。这类真菌致病性不强，大多在久病体弱、免疫力低下或在菌群失调时发生，如肿瘤、糖尿病、器官移植及HIV患者、长期使用广谱抗生素、放疗、化疗等过程中易伴这类真菌感染。其致病性虽弱，不及时诊治亦可危及生命。

3.曲霉 

广布自然界，生长迅速，在沙保培养基上形成丝状菌落。开始为白色随着分生孢子的产生而呈各种颜色。引起人类致病最多见的为烟曲霉(A.fumingatus)，主要由呼吸道入侵，引起支气管哮喘或肺部感染。 

4.毛 霉

特征是一般只有无隔菌丝、分枝成直角、无性生殖、产生孢子囊和孢子囊孢子。

此菌一般为面包、水果上和土壤中的腐生菌。

在机体免疫力低下或医源性输液和污染的绷带等可导致感染，大多数发展急剧，可累及脑、肺和胃肠道等多个器官。好侵犯血管，形成栓塞，死亡率较高。

5.卡氏肺孢菌 

生物学特性与一般真菌有些不同，可分几个阶段：最初为营养型，呈单核的孢子囊(4~5μm);成熟的孢子囊(5.0μm)内含8个球状、卵圆状或梭状孢子;孢子囊成熟后破裂，释放出其中的孢子 。

卡氏肺孢菌广布于自然界，可引起健康人的亚临床感染。但对一些先天免疫缺陷或因各种原因受到免疫抑制的患者，可引起肺炎。