电泳迁移率ppt

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电泳迁移率ppt

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这是电泳迁移率ppt,包括了背景知识介绍,凝胶电泳具体实验操作,应用,自由界面电泳没有固定支持介质,电泳的基本原理等内容,欢迎点击下载。

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一、背景知识介绍vsb红软基地
二、凝胶电泳具体实验操作vsb红软基地
三、应用vsb红软基地
一、背景知识介绍vsb红软基地
(一)实验材料和试剂vsb红软基地
实验材料:vsb红软基地
    PCR产物,植物基因组DNA,质粒DNA等;vsb红软基地
实验试剂:vsb红软基地
    电泳缓冲液; vsb红软基地
    电泳载样缓冲液; vsb红软基地
    电泳染料。 vsb红软基地
(二)实验仪器vsb红软基地
4.1 EB染料vsb红软基地
4.2  Gold viewvsb红软基地
二  凝胶电泳具体实验操作vsb红软基地
包括拿到产物之后的处理到配胶、点样、跑胶、切胶到胶回收等操作步骤。vsb红软基地
冷冻、离心。vsb红软基地
      拿到产物之后,应先置于4℃冰箱冷冻,因为产物温度高会影响跑胶的效率以及很可能造成产物的气溶胶污染,待温度降下来后,瞬时离心。vsb红软基地
配胶。vsb红软基地
      琼脂糖凝胶。根据产物的分子量的大小需配置不同浓度的胶。见下图:vsb红软基地
凝胶板有30ml、50ml、100ml三种,以制备50ml的0.1%的胶为例,于电子称上称取琼脂糖0.5g,倒入250ml锥形瓶,用量筒量取50ml的1×TAE缓冲液倒入锥形瓶,混匀,用锡箔纸盖住瓶口,置于电磁炉里中高火加热两分钟。同时将干净的置胶板放好、梳子插好,并备好染色剂。vsb红软基地
3.染色和倒胶。vsb红软基地
    染色剂用goldview,其分辨率较EB稍差,但安全性更高。使用时避免其接触皮肤和眼睛。根据经验30ml的胶加4.5μL、50ml加7.5μL、100ml加10μL。待锥形瓶中凝胶溶液冷却至60℃左右时(不烫手),将goldview加入其中,摇匀,然后将凝胶溶液倒入置胶板上。避免气泡。vsb红软基地
待胶凝固后(约15~30min),垂直拔出梳子,将胶放入电泳槽中,点样孔靠近负极。电泳液液面应至少高出胶板表面1~2mm。vsb红软基地
4.加样。vsb红软基地
    取一只PE手套,铺平。根据样本个数将loading buffer点于手套上,一般每10μL点8~10个,吸取6μL样本和loading buffer吹打3~4次混匀后按顺序加入点样孔(小孔)中,点样时要预留出点marker的孔,一般maker点在两边紧邻样本的点样孔中。vsb红软基地
loading buffer的功能主要有两个。第一、指示剂溴酚蓝和二甲苯酚起到指示的作用,显示电泳的进程,以便我们适时终止电泳;第二、里边的成分甘油可以加大样品密度,使样品密度大于TAE,从而沉降到点样孔中,防止样品飘出点样孔。vsb红软基地
5. 电泳:vsb红软基地
    点完样后,将胶摆正,盖上电泳槽盖,设好电压电流以及跑胶时间,按启动开始跑胶。一般电压用5V/cm。一般等loading buffer中的溴酚蓝跑到胶的2/3处,即可关闭电泳仪,将胶取出送至成像仪拍照分析。vsb红软基地
6. 胶回收:vsb红软基地
    跑完胶后,如有需要,可做胶回收,首先是切胶,将胶放在紫外分析仪的平台上,打开开关,在紫外下可以看到清楚的目的条带,迅速用刀片将目的条带切下,关闭电源,将目的条带装入已标记好并称重过的1.5ml离心管中,再次称重。然后可用TIANGEN的胶回收试剂盒进行DNA的回收。vsb红软基地
附1.常用电泳缓冲液配方:vsb红软基地
附2.核酸电泳常见问题及解决方案:vsb红软基地

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