艾滋病健康教育ppt课件模板

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简介

艾滋病健康教育ppt课件模板,来自中华医学会检验中心的PPT,主要是了解艾滋病的特点概述,诊断和治疗,分期以及相关知识点等,欢迎点击艾滋病健康教育ppt课件模板下载哦。艾滋病,医学全名为“获得性免疫缺陷综合症”,是人体感染了人类免疫缺陷病毒(HIV),又称艾滋病病毒所导致的传染病。值得一提的是,HIV本身并不会引发任何疾病,而是当免疫系统被HIV破坏后,人体由于失去抵抗能力而感染其他的疾病导致死亡。

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  《全国艾滋病检测技术规范》要点
中华医学会检验中心
联系:13103221307
一、   特点概述
1.《全国艾滋病检测技术规范(2004年版)》是参考国际标准ISO/DIS 15189-2004 、ISO/DIS 15190-2004和Guidelines for Using HIV Testing Technologies in Surveillance WHO/CDS/CSR/EDC/2001.16 UNAIDS/01.22E ISBN 9713-92-063-7对〈全国艾滋病检测技术规范(试行)〉进行全面修订而成,与国际检测技术和策略紧密接轨。
2.对原有章节的修改和完善:样品的采集和处理,HIV抗体的检测(目的、要点、方法及结果报告),HIVP24抗原检测(方法、结果报告和解释),艾滋病检测实验室安全防护等。
3.配合VCT(自愿咨询检测)和当前防治工作的需求,新增了以下内容: HIV抗体检测的替代策略,婴幼儿HIV感染诊断,HIV RNA定量测定(病毒载量测定), CD4+/CD8+ T淋巴细胞检测,职业暴露预防和补充实验室意外事故紧急处理措施。
4.按技术规范要求,对每章内容均标明了“范围”和“规范性引用文件”。
一、   对原有章节的修改和完善:
1.样品的采集和处理
(1)规定了样品的采集和处理适用范围:
    用于艾滋病病毒(HIV)检测的血清、血浆和全血样品的采集和处理方法,适用于HIV抗体检测、抗原检测、核酸检测、CD4+/CD8+T淋巴细胞测定和HIV分离培养。
(2)应根据实验要求选用适当的抗凝剂:如CD4+/CD8+T淋巴细胞测定可选用K3EDTA或肝素或枸橼酸钠,HIV病毒分离、核酸定性/定量检测可选用K3EDTA或枸橼酸钠。
(3)样品的保存 用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品不能长期保存,样品采集时间超过48h则不可检测。
(4)样品的运送
应采用WHO提出的三级包装系统:
第一层容器:装样品,要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内,试管上应有明显的标记,标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料,以免碰碎。随样品应附有送检单,送检单应与样品分开放置。
第二层容器:要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器,可以装若干个第一层容器。将试管装入专用带盖的容器内,容器的材料要易于消毒处理。
第三层容器:放在一个运输用外层包装内,应易于消毒。在第三层容器外面要贴标签(数量,收、发件人)。
(5)样品的接收
打开标本容器时要小心,以防内容物泼溅。
   样品处理时若内容物有可能溅出,则应在生物安全柜中戴手套进行。同时应戴口罩、防护眼镜,以防皮肤或粘膜污染。
如果污染过重或者认为样品不能被接受,则应将样品安全废弃。并要将样品情况立即通知送样人。
2.HIV抗体的检测
(1)HIV抗体的检测规定了HIV抗体的检测方法、检测程序、检测报告及检测策略;其适用范围为:
    各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。可作为对HIV感染者/AIDS病人的诊断、报告和处理的实验室依据。并规定了规范性引用文件。
(2)HIV抗体检测实验室
应符合《全国艾滋病检测工作规范(1997年版)》中对检测实验室人员、建筑设施和设备等条件的要求。
应符合《实验室生物安全通用要求》(GB 19489-2004)对II级生物安全实验室(BSL-2)的各项要求。
(3)HIV抗体检测的目的和要点
HIV抗体检测的目的:HIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。
以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势而进行的检测,检测的人群包括各类高危人群和一般人群。
以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况而进行的检测,包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。
以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV而进行的检测,包括献血员筛查和原料血浆筛查。
HIV抗体检测的要点:
筛查试验阳性不能出阳性报告。
严格遵守实验室标准操作程序(SOP)。
严格按照试剂盒说明书操作。
注意防止样品间交叉污染。
(4)HIV抗体检测的筛查方法
常用的筛查方法是酶联免疫试验(ELISA)
  快速检测(RT)及其它检测
 随着对HIV感染者和AIDS病人抗逆转录病毒治疗的进展,及对无症状HIV感染者提供自愿咨询检测(VCT)的迫切需求,简便、快速的HIV检测方法被广泛应用。常用的主要有以下几种:
①明胶颗粒凝集试验(PA):
    PA是HIV血清抗体检测的一种简便方法,是将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体,与待检样品作用,混匀后保温(一般为室温)。
    当待检样品含有HIV抗体时,经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应,根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。
    PA试剂有两种,HIV-1和HIV-2抗原共同致敏的PA试剂(AFD HIV-1/2 PA),已经我国食品药品监督管理局(SFDA)注册批准;HIV-1、HIV-2抗原分别致敏的PA试剂(SERODIA-HIV-1/2)可初步区分HIV-1型和HIV-2型,目前我国尚未引进。
②斑点EIA(dot-EIA):以硝酸纤维膜为载体,将HIV抗原滴在膜上成点状,即为固相抗原。加血清样品作用,以后步骤同ELISA。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10 min以内,使用抗原量少。
③斑点免疫胶体金(或胶体硒)快速试验:
    与斑点EIA相似,也是以硝酸纤维膜为载体。区别在于不用酶标记抗体,而代之以红色的胶体金(或胶体硒)A蛋白,用渗滤(或层析)法作为洗涤方法。
    试剂稳定,可室温长期保存。试验时不需任何设备,迅速、简便、特异性较好,敏感性约相当于中度敏感的ELISA,适用于应急检测、门诊急诊个体检测。
    目前已有在国内被SFDA批准注册的国外进口试剂和国内产品。一般可在1030min内判读结果。
④艾滋病唾液检测卡:
    在硝酸纤维膜上包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原,可同时检测含在唾液中的HIV-1/HIV-2抗体,原理为酶免疫间接法。
    主要检测唾液中的HIV IgA与IgG抗体,敏感性特异性与ELISA相近,可避免静脉穿刺。但样品预处理时间长且售价较高。
    以唾液为样品测定HIV抗体的ELISA、免疫印迹法(WB)试剂美国FDA已批准。
⑤其它快速筛查试验方法:家庭HIV检测(Home Access System)等。
尿液HIV抗体检测
    1996年美国FDA首次批准HIV-1尿液ELISA试剂,我国也正在研制尿液HIV抗体检测试剂。
    主要适用于静脉注射毒品(IDUs)人群和其它高危人群的大面积流行病学调查、监测。筛查阳性者仍需采血做确认试验才能确定。
(5)HIV抗体筛查检测中初筛和复检试验的检测和报告方法
根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛和重复检测(复检)。
初筛试验:以第三代ELISA(双抗原夹心法)为例。
备好试剂盒、待检样品和外部对照质控血清后,按试剂盒说明书以及质控和安全防护要求进行筛查检测。
实验结果
①阴性对照(NC),HIV-1阳性对照(PC1),HIV-2阳性对照(PC2)
    NC 必须<0.25方可用,排除NC≥0.25的值,计算NC平均值。
NC界限范围:0.6倍NC均值<NC<1.4倍NC均值。
②符合以下条件的实验成立:
两个以上的NC可用(<0.25) 。
PC1-NC均值 ≥ 0.4,PC2-NC均值 ≥ 0.4
③Cut off值 = 阴性对照均值 + 0.100
小于Cut off为阴性,大于或等于Cut off为阳性
4)报告:
对HIV抗体筛查试验,呈阴性反应者可出具“HIV抗体阴性”报告(可用附表1);
对初筛试验呈阳性反应者不能出阳性报告,可出具“HIV抗体待复查”报告(附表1)。
如需送上级实验室进行复测或确认,需要填写“HIV抗体复测送检单”(附表2),经1名检验人员和1名具有中级以上技术职称的人员审核签字。送当地艾滋病筛查中心实验室,再转送艾滋病确认实验室,或在本实验室复检后直接送确认实验室。
复检试验:对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应,则报告HIV抗体阴性;如均呈阳性反应,或一阴一阳,需送艾滋病确认实验室进行确认。
 对筛查阴性和阳性者,均需做好检测后咨询。
(6)HIV抗体确认试验结果报告
确认试验由确认实验室根据检测结果出具“HIV抗体确认检测报告单”(附表3),报告HIV抗体阳性(+)、HIV抗体阴性(-)及HIV抗体不确定(±)。
符合HIV-1抗体阳性判断标准,报告“HIV-1抗体阳性(+)”,并按规定做好检测后咨询、保密和疫情报告工作。
符合HIV抗体阴性判断标准,报告“HIV抗体阴性(-)”。如果近期有高危行为,如性乱、注射毒品等,或有急性流感样症状等情况,为排除因“窗口期”而出现的假阴性结果,建议高危行为后3个月时再做抗体检测。也可进行HIV-1 P24抗原或HIV核酸检测,作为辅助诊断。
符合HIV抗体不确定判断标准,报告“HIV抗体不确定(±)”,在备注中应注明“3个月后复检”,同时进行以下处理:
1) 随访复检:每3个月随访复检1次,连续2次,共6个月。如果检测时暴露时间已超过3个月,则在3个月后随访1次即可。将前后2份样品同时检测,仍呈不确定或阴性则报告HIV抗体阴性,如果在随访期间发生带型进展,符合HIV抗体阳性判定标准则报告HIV-1或HIV-2抗体阳性。
2) 必要时可做HIV-1 P24抗原或HIV核酸测定,但检测结果只能作为辅助诊断依据,确认报告要依据血清学随访结果。
省艾滋病确认中心实验室难以确认的样品,送国家艾滋病参比实验室确认。
同一受检对象的样品在不同实验室得到不一致的确认结果时,由国家艾滋病参比实验室和艾滋病确认实验室审评及技术指导专家组予以仲裁。
3.HIV P24抗原的检测
规定了P24抗原的检测方法、适用范围和规范性引用文件。
(1)适用范围:
HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断。
HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助鉴别诊断。
第四代HIV-1抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性反应,但HIV-1抗体确认阴性者的辅助诊断。
监测病程进展和抗病毒治疗效果。
(2)HIV P24抗原检测方法
P24抗原的检测通常是采用ELISA夹心法,已知抗体包被固相反应板孔底,加入待测血清,若血清中含有P24抗原则与包被抗体形成抗原-抗体复合物,再加入酶(HRP)标记的HIV-1抗体与抗原结合,加底物显色,在酶标仪上读结果。
为了提高检测血清中P24抗原的敏感性,需先将血清中免疫复合物解离后再进行测定,目前已发展了ICD P24抗原(immun-complex disassociate,免疫复合物解离,ICD)测定试剂,用于HIV-1 P24抗原测定。
即使将复合物解离,敏感性提高,也只能在大约50%无症状感染者中检出P24抗原。
4)结果报告和解释
HIV-1 P24抗原的阳性结果必须经过中和试验确认,若阳性标本的OD值比中和反应前减少50%以上,才确定为HIV P24抗原结果阳性。
HIV-1 P24抗原阳性仅作为HIV感染窗口期的辅助诊断依据,不能据此确诊。
HIV-1P24抗原检测的敏感性为3090%,低于病毒载量测定。HIV-1P24抗原阴性结果只表示在本试验中无反应,不能排除HIV感染。
婴幼儿经过胎盘或哺乳从母亲获得的HIV抗体不能用于诊断是否经母婴传播感染HIV。婴幼儿体内从母亲得到的HIV抗体持续存在时间最长不超过18个月。
在18月龄以前可以用多种不同的非抗体依赖性的检验方法对新生儿HIV感染进行辅助诊断,包括:HIV P24抗原检测、病毒分离培养、RNA或DNA测定。
4.艾滋病检测实验室安全防护
规规定了全国各级各类艾滋病实验室的安全防护,规范性引用文件
(1)实验室生物安全级别
1)艾滋病血清学检测
艾滋病血清学检测(包括筛查和确认实验室)、免疫学和核酸检测应在符合Ⅱ级生物安全实验室(BSL-2)要求的艾滋病检测实验室中进行。
2)HIV分离、研究
HIV分离、细胞培养及研究工作应在Ⅲ级生物安全实验室(BSL-3)中进行。
(2)实验室管理要求
1)  建立安全制度
①实验室的仪器设备、建筑和设施的安全性应符合《实验室生物安全通用要求》GB 19489-2004和本《规范》要求。
②根据本《规范》制订本实验室的安全工作制度或安全标准操作程序(S-SOP),该制度或程序应适用于现有的实验条件,并与实验室其它规定相一致。
③无论是否发生意外事故,每年都要对安全工作制度或安全标准操作程序及其实施情况进行检查和修订,并有记录。
④制定意外事故处理预案。建立意外事故的登记和报告制度。
⑤实验室主任负责组织对突发事件和职业暴露事故进行调查、登记、处理和报告。
2)人员培训和管理
①向管理人员和所有检测人员提供并完成与工作相关的充足有效的技术培训。强化全员安全培训和“普遍性防护原则”安全意识。所有工作人员必须经过HIV检测技术和省级以上艾滋病实验室安全培训,包括上岗培训和复训,并接受实验室管理人员的监督。实验室的安全责任人要对工作和环境的安全负责,所有工作人员都有责任保护自己和他人的安全。
②必须告知新上岗人员实验室工作的潜在危险,进行安全教育,直至有能力后方可单独工作。
③实验室主任应了解所有工作人员。在安排工作区域时,要根据人员的工作种类和所涉及的生物材料,对实验室环境做好安全检查。
④新调入人员、外来合作、进修和学习的人员在进入实验室之前必须经过实验室主任的批准。非实验室人员和非实验室物品不得进入实验室。
⑤严格执行实验室工作人员年度采血检测HIV抗体和备案制度,工作人员血清应长期保留。实验室工作人员从事工作前必须进行HIV抗体和乙肝、丙肝等肝炎病毒标记物的检测;注射乙肝疫苗;每半年-1年进行1次HIV抗体检测,并保留血清样品。
3)建立严格的保密制度并定期检查
①与HIV/AIDS相关检测项目的所有资料均应严格保密,包括送检单与检测记录的保管、报告单的发放和工作人员年度采血检测等。
②艾滋病检测实验室所有人员应具有高度的保密意识。不可对无关人员透露检测结果。
③保密制度纳入年度考核,发现问题及时处理并根据情况修订保密制度。
4)严格质量管理
①按要求做好安全操作的管理以及检测试剂的选择、检测工作的室内质控和室间质评。
②对所有检测报告严格把关,杜绝漏报、误报现象的发生。
5)对存放试剂和有毒物区域的监控
①冷藏柜、冰箱、培养箱和存放生物试剂、化学危险品、放射性物质的容器置于工作人员视线之外的地点时应上锁。
②应设有专门储存阳性血清、质控品的低温冰柜和/或血清库毒种库,并应上锁,专人管理。
各级实验室血清库/毒种库的设置按有关规定执行。
6)建立应付突发事件的措施
①在紧急预案中要包括在紧急事件发生时通知实验室主任、设备管理员、实验室工作人员和设备安全员。
②实验室主任和设备安全员要遵循有关规定,报告、调查和处理突发事件以及可能发生的意外职业暴露。
(3)废弃物处置和消毒
1)废弃物处置:
①废弃物处置应符合《实验室生物安全通用要求》(GB 19489-2004)。
②从艾滋病实验室出来的所有废弃物,包括不再需要的样品、培养物和其它物品,均应视为感染性废弃物,应置于专用的密封防漏容器中,安全运至消毒室,并在高压消毒后再进行处理或废弃。
2)HIV常用的消毒方法
物理消毒方法:
①高压蒸汽消毒,121℃,保持1520min;
②干燥空气烘箱消毒(干烤消毒),140℃,保持23h。
HIV常用的化学消毒方法:
HIV最常用的化学消毒剂是0.5%次氯酸钠、70%乙醇和2%戊二醛,保持1030 min。
①废弃物缸:0.5%次氯酸钠。
②生物安全柜工作台面和仪器表面:70%乙醇。
③溢出物:0.5%次氯酸钠。
④污染的台面和器具:40%甲醛水溶液,也可以用过氧化氢或过氧乙酸。器械可用2%戊二醛消毒。
一、 配合VCT(自愿咨询检测)和当前防治 工作的需求, 新增有关内容:
1.HIV抗体检测的替代策略
除常规检测程序以外,可以根据不同的目的,对HIV流行强度不同的地区和不同人群采用不同的替代策略,见表1。
(1)替代策略Ⅰ(全国HIV感染疫情报告检测策略)
检测程序及结果报告
①先用一种筛查试剂检测,出现阴性反应则报告“HIV抗体阴性(-)”。出现阳性反应则用两种不同原理或不同厂家的试剂复测(其中包括进口第三代ELISA试剂)。
②两种试剂复测均为阳性,且其中第三代ELISA试剂复测样品OD值与临界值(Cutoff)的比值(S/CO)≥6.0者可作阳性考虑,上报疫情(附表4)。两种试剂复测结果均为阳性,但第三代ELISA试剂复测S/CO比值在1.05.9之间,或两种试剂复测结果呈一阴一阳,应进一步作确认试验,按照确认试验的标准判断结果(图3)。
2)替代策略Ⅱ(HIV感染高流行地区高危人群VCT检测策略)
应在确认中心实验室和确认实验室或以上实验室指定的筛查实验室进行,用高质量筛查试剂检测及判断结果(见6.2.2)。使用该策略判断结果,阳性报告须由确认中心实验室和确认实验室或以上实验室认可的筛查实验室出具。
检测程序及结果报告:
①先用第一种筛查试剂(ELISA-1)检测,出现阴性反应报告HIV抗体阴性;出现阳性反应则报告“HIV抗体待复查”,并用第一种和第二种酶联试剂(ELISA-1和 ELISA-2)复检。
②两种ELISA试剂检测结果均阴性则报告HIV抗体阴性;两种ELISA试剂检测结果均阳性,且S/CO比值均大于或等于6.0者,用第三种筛查试剂(高特异性筛查试剂)检测,如果第三种试剂检测结果为阳性,在符合使用该策略条件的地区和人群中可以出具“HIV-1抗体阳性(+)”报告,使用“HIV抗体替代策略检测报告单”(附表5)。
③下列情况均需做确认试验,按照确认试验的结果出报告:两种ELISA试剂检测结果一阴一阳、两种ELISA试剂检测结果均阳性但一种或二种S/CO在1.0~5.9之间、第三种筛查试剂检测结果为可疑或阴性。
3)替代策略Ⅲ(高流行地区一般人群及其它地区各类人群VCT检测策略,图5)
检测程序及结果报告:
①先用一种高敏感性筛查试剂检测,出现阴性反应报告HIV抗体阴性;出现阳性则用第二种筛查试剂(高特异性)复检。
②第二种筛查试剂检测阴性则用第三种筛查试剂(另一种高特异性试剂)检测;第二种筛查试剂检测为阳性则按疑似阳性咨询,建议进一步做确认试验,按确认试验的结果报告。
③第三种筛查试剂检测为阴性则报告HIV抗体阴性;第三种试剂检测为阳性按疑似阳性咨询,建议进一步做确认试验,按确认试验的结果报告。
2.婴幼儿HIV感染诊断(根据替代策略制定)
婴儿随访和检测服务流程
纳入当地艾滋病综合防治系统
婴儿9~12月龄进行HIV抗体检测
视为HIV抗体(-)常规儿童保健
18月龄时再进行HIV抗体检测
结果(+)
用另一种检测试剂再次检测
结果(-)
结果(+)
结果(-)
对HIV(+)产妇进行咨询,指导人工喂养
3.HIV RNA定量测定(病毒载量测定)
(1)实验室功能分区    实验室原则上应分为4个独立工作区
1)试剂准备区、样品处理区、扩增区和扩增产物分析区,并设在不同房间。前两区为扩增前区,后两区为扩增后区。各区的功能是:
①试剂准备区:扩增试剂的配制、分装和保存。
②样品处理区:样品登记、分装;核酸提取、保存和加样。
③扩增区:核酸扩增。
④扩增产物分析区:扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。
2)扩增前区与扩增后区应严格分开,须使用不同的房间,两区之间最好有一定的间隔。
3)使用商品化试剂盒可在样品处理区进行少量试剂配制。
4)在满足下列操作和清洁处理要求的前提下样品处理区和试剂准备区可设在同一房间内:
① 在生物安全柜内操作。
②  每个实验人员、实验组分别使用各自的试剂及耗材。
③ 盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。
④ 用有效的方法对操作区域和共享器具在实验前后进行清洁及消毒。
(2)人员
进行HIV核酸检测的人员须具有艾滋病实验室的上岗资格,并接受过省级以上艾滋病实验室安全及实验操作技术培训。
(3)设施和设备
1)根据检测项目配备相应的设施和设备。
2)各区域的设施和设备应为区域性专用,开展特定试验时应根据要求在相应区域放置专用设备。
以下是各区域应配备的设备:
①试剂准备区:冰箱、洁净工作台、离心机、加样器、振荡器、废弃物容器。
②样品处理区:冰箱、生物安全柜、离心机、加样器、振荡器、恒温水浴、上下水设备、废弃物容器。
③扩增区:核酸扩增设备、冰箱、离心机、加样器、废弃物容器。
④扩增产物分析区:冰箱、离心机、加样器、电泳仪、振荡器、恒温水浴、上下水设备、废弃物容器、核酸污染物处理设备等。
⑤ 配备-80℃冰箱。
3)各区域应备有工作人员专用的工作服或一次性工作服、帽子和鞋套,必要时配备防护眼镜和/或口罩。
(3)方法和试剂
1)方法
常用的HIV RNA定量测定方法有:
逆转录PCR试验(RT-PCR);
核酸序列扩增试验(NASBA);
分支DNA杂交试验(bDNA)。
不同病毒载量检测方法的比较见表2
(John G.Bartlett、Joel E.Gallant,Medical Management of HIV Infection 2004 Edition p1-5)
(5)HIV核酸定量检测的意义
1)辅助诊断
在一般情况下,HIV抗体检测足以对HIV感染与否做出正确诊断,但在特殊情况下,单纯抗体检测不足以完成明确的判定,如出现某些非典型的抗体反应形式,特别是不确定反应时,RNA的测定可提供非常有用的证据。虽然单纯使用RNA测定不能完全确定感染与否,但当RNA测定出现较高拷贝数的阳性结果时(>3,000c/ml),感染发生的可能性非常大。
需要指出的是,每一种RNA定量系统都有其最低检测限,即可以测出的最低拷贝数,通常在50100c/ml以上,RNA定量检测时未测出不等于样品中不含有病毒RNA。
另外,许多AIDS病人/HIV感染者在接受抗病毒治疗后其病毒载量可降至非常低的水平,还有少数HIV感染者在感染后长期处于病毒水平非常低的状态,进行RNA测定时往往测不出来。因此,使用此指标应综合其它检测数据和样品背景情况进行综合判断。
2)早期诊断
在HIV感染的窗口期无法使用抗体检测进行诊断。而在感染早期,在抗原峰出现前后通常出现一个病毒载量的高峰,此高峰通常高于发病时的血浆病毒水平,并且有证据表明这个时期的病毒具有很高的感染能力。这个高峰在免疫系统产生反应后,尤其是在细胞免疫出现后开始下降。因此早期病毒RNA测定具有特殊的意义。该方法也可用于HIV感染孕妇所生婴儿的早期辅助诊断。
目前国际上正在尝试使用这种检测对采供血样品进行多个样品混合后的RNA检测以减少窗口期危险(降低“残余危险度”)。
3)病程监控
根据HIV感染发生后病毒载量具有一定的变化规律,并且这种变化与疾病的进程有着密切的相关性。因此定期进行病毒载量的检测有助于确定疾病发展的阶段,以确定相应的治疗方案。
通常在HIV感染后无症状期内发生的感染或其它临床症状很难与AIDS发病时的症状区别,为确定一个刚发生的症状是否与HIV的感染有关,医生往往需要观察病人的实验室指标,病毒载量就是一个非常重要的指标。
4)指导治疗方案及疗效判定
临床实践证明,并非在任何情况下HIV感染者都应该进行抗病毒治疗。这不单是经济上的原因,更重要的是由于抗病毒药物的副作用和疗效原因。通常在病毒载量达到一定水平后(如>35,00050,000c/ml)抗病毒治疗才具有良好的效果。
在进行治疗后,通过病毒水平的检测才能确定治疗是否有效,通常在治疗前后病毒水平降低0.5 log以上才被认为临床有效。
5)预测疾病进程
HIV感染后疾病进程与病毒载量的关系十分密切,观察HIV感染者病毒RNA水平可大致预测其发病的可能。病毒载量与6年发病率的关系为:<500c/ml时5.4%;5013,000c/ml时16.6%;3,00110,000c/ml时31.7%;10,00130,000c/ml时55.2%;>30,000c/ml时则为80%。
当HIV感染者CD4+T细胞计数<200/μl时,病毒载量与36个月发展至AIDS的危险为:<10,000c/ml为4.9%;10,00029,999c/ml为12.7%;30,00099,990c/ml为17.7%;>100,000c/ml为22.4%。在CD4+ 细胞数相同的情况下,年纪大的比年轻患者发展至AIDS的危险更大(AIDS 2004;18:51-58.)。
4. CD4+/CD8+ T淋巴细胞检测
(1)实验室条件
1)人员
进行HIV感染者CD4+ 和CD8+ T淋巴细胞检测的人员须具有艾滋病实验室的上岗资格,并接受过省级以上艾滋病实验室安全及实验操作技术培训。
2)设施和设备
①样品处理区:生物安全柜、离心机、冰箱、水浴箱、旋转振荡器、精确移液器(5μl50μl、20μl200μl、200μl1000μl)。
②流式细胞仪检测区:流式细胞仪
3)功能分区
实验室原则上应分为样品处理区和流式细胞仪检测区,各区的功能是:
①样品处理区应达到生物安全Ⅱ级(BSL-2)实验室要求,用于样品处理、流式检测样品制备。
②流式细胞仪检测区用于制备好的样品上机检测。
(5)结果报告
1)按照实验结果填写CD4+ 和CD8+ T淋巴细胞检测报告单,检测人员签字。
2)根据CD命名标准报告数据,用一个简短的描述解释命名的意义。注意:CD4+T细胞是指辅助性T细胞。正确的报告CD4+ T细胞应该是那些CD4+ 和CD3+ 双阳性的细胞。同样地,CD8+ T细胞是T-suppressor/cytotoxic细胞,为CD3+ 和CD8+ 双阳性的细胞。在CD4+ 和CD8+ 的判定中重要的是排除其它细胞(非T细胞)的干扰。
3)以全部淋巴细胞的百分比报告数据,并且修正门内淋巴细胞纯度。例如,如果淋巴细胞纯度是94%,而CD3值为70%,可以通过0.7除以0.94乘以100得到74%,修正CD3的值。
4)为检测免疫亚群而取血的同时,用该血样作自动测定全血细胞(CBC)计数白细胞(WBC)及分类测定,报告淋巴细胞亚群绝对数值。
①用淋巴细胞的总数(来自于WBC及分类)乘以淋巴细胞亚群的百分率(从流式细胞仪的数据中得到),计算绝对数值。
②如可能,应报告计数的百分率和绝对值。5)单平台一步法由计算机软件直接出结果并打印出报告单,报告单的内容包括如下结果:CD45+ Abs Cnt;CD3+ Abs Cnt;CD3+ CD4+ %T Lym;CD3+CD4+ Abs Cnt;CD3+CD8+ %T Lym;CD3+CD8+ Abs Cnt;Th/Ts及其正常参考值范围(BD公司建立的正常参考值范围见表3),检测人员签字。
(6)检测CD4+、CD8+ T淋巴细胞的意义
T淋巴细胞是机体免疫系统内功能最重要的一群细胞。在正常机体内各淋巴细胞亚群相互作用,维持着机体正常免疫功能。当不同淋巴细胞亚群的数量和功能发生异常时,可导致机体免疫功能紊乱并发生一系列病理变化。因此,T淋巴细胞亚群的免疫分型能够提供有关患者免疫状态的重要信息。AIDS是由HIV引起的一组综合征,HIV主要侵犯人CD4+ T淋巴细胞,导致其数量上的减少和功能缺陷,使机体免疫平衡被打破造成免疫功能低下,最终导致各种机会感染和肿瘤。因而,对HIV感染者和AIDS病人定期进行CD4+、CD8+T淋巴细胞 检测具有十分重要的意义。主要表现在以下几个方面:
1)了解机体的免疫状态以进行疾病分期,如美国CDC就是以此为基础制订了HIV感染者/AIDS病人的诊断和分类标准(见表4),目前国内外仍被采纳应用。
2)长期监测CD4+ T淋巴细胞绝对数的变化,有助于了解患者的病情发展,决定正确的治疗方案,并观察对治疗的反应。如判断HIV感染者的临床合并症(当CD4+ T淋巴细胞细胞<200/l时,很容易发生卡氏肺孢子虫肺炎;当CD4+ T淋巴细胞<50时,易发生CMV感染=。
3)帮助确定抗HIV药物治疗及预防机会性感染治疗的适应症,如当CD4+ T淋巴细胞<200/ul时,应给予抗卡氏肺孢子虫肺炎的预防性治疗。
4)是用来评价一些新的、针对HIV的治疗方法和治疗药物疗效的重要指标。
表4  1993年修订的HIV感染的分类系统和青少年及成人扩展的
          AIDS监测病例定义
备注:A、B、C的解释请参考《艾滋病病毒感染的诊断与治疗》邵一鸣、蒋岩、栾文民主译,科学出版社,2002年,北京。
5.艾滋病实验室的安全防护和职业暴露预防
(1)由于甲醛有致癌作用,不宜用于生物安全柜和实验室的常规空气消毒。在“意外和事故的紧急处理措施”中新增了“低温蒸汽甲醛气体消毒”:
如果实验室一旦发生了重大泼溅事故,应按严重情况处理,并采取以下措施:
①从污染处疏散人员,但要防止污染扩散;
②控制污染——锁门并防止进一步进入;
③通知实验室主管领导、安全负责人等,以便查清情况,确定消毒处理的程序;
④如果认为合适,可进行生物安全柜和/或实验室的低温蒸汽甲醛气体消毒,但生物安全柜和/或实验室必须有可靠的密闭性能,人员必须完全离开。【生物安全柜:25ml福尔马林和等量水混合后放在一个蒸发皿中使其在密封的生物安全柜中蒸发,保持至少6h,最好过夜。实验室:福尔马林和水的体积根据实验室大小而定】。具体操作可按说明书执行。
⑤发生溢出后应离开房间约30分钟。  穿防护服,被溅的地方用经消毒剂浸泡的吸水物质覆盖;消毒剂起作用10-15分钟后清理该地方。移走吸水性物质,用消毒剂冲洗该地方。
(2)艾滋病的职业暴露后预防:
艾滋病的职业暴露:是指医务工作者、实验室工作人员及有关监管人员在从事HIV/AIDS诊断、治疗、护理、预防、检验、管理工作过程中,暴露于含有HIV的血液、体液和实验室培养液,即暴露于含有HIV的液体等引起的危害。
HIV/AIDS的职业暴露后预防(Postexposure Prophylaxis,PEP)应包括急救、对暴露级别的评估、暴露源严重程度的评估、预防性用药的推荐处理方案、报告与保密。
1)急救处理
①刺激出血:职业暴露的紧急处理,只要情况允许,应实行急救。如皮肤有伤口,应当反复轻轻挤压,尽可能挤出损伤处的血液。
②肥皂和清水冲洗伤口或沾污的皮肤。如果是粘膜暴露,应用生理盐水(或清水)反复冲洗。
③受伤部位的消毒与包扎:伤口应用消毒液(如70%酒精、0.2%次氯酸钠、0.2%0.5%过氧乙酸、0.5%碘伏等)浸泡或涂抹消毒,并包扎伤口。
④由于暴露后有无采取急救措施对职业暴露后HIV感染有一定影响,故应尽量为受伤者寻找医疗机构,以求正确护理伤口和暴露后急救处理。
⑤可介绍已发生职业暴露的人员到艾滋病防治机构进一步咨询和处理。

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