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简介
这是微生物分离纯化ppt，包括了实验目的，实验原理，实验器材及试剂，实验步骤，注意事项，思考题等内容，欢迎点击下载。
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实验六 微生物的分离纯化与接种技术 一、实验目的 1.掌握常用接种工具的使用 2.掌握斜面培养基、液体培养基接种法 3.掌握倒平板技术 4.掌握各种分离单菌落的技术 二、实验原理 三、实验器材及试剂 接种环、酒精灯、试管、移液管、培养皿、涂布棒、营养琼脂培养基、营养肉汤培养基、生理盐水、大肠杆菌菌液。 四、实验步骤 1. 接种环的使用 接种环是用铂丝或细电炉丝制成的，使用前后都要用酒精灯外焰严格灭菌。 四、实验步骤 2. 斜面接种（每人接种2支试管斜面，1支斜面接斜面，1支液体接斜面） 将菌种管（若是液体菌种应先摇匀）与空白斜面培养基管握在左手大拇指和其他四指之间，菌种管位于上侧，培养基管位于下侧，斜面均向上。 右手持接种环火焰灭菌。以右手掌心、小指和无名指同时夹取两管口的棉塞，将两试管口迅速通过火焰灭菌。 在火焰附近，用灭菌的接种环从菌种管挑取少量菌苔或一环菌液，伸进待接种的培养基管斜面底部，向上“Z”形划线。接种时不要划破培养基表面，沾菌的接种环进出试管时不应触及试管口。 接种完后灼烧管口，塞上棉塞。灼烧接种环，放回原处。 将接种好的试管斜面放到37℃培养箱中培养24h后观察结果。 四、实验步骤 四、实验步骤 4. 倒平板（每组倒6或8块营养琼脂平板） （1）熔化培养基：电炉加热熔化120mL（或160mL）那瓶营养琼脂培养基（电炉加热时人要在旁边看着，防止培养基爆沸！）。 （2）倒平板：待培养基冷却到50℃左右（用手抓瓶子不烫手）后，取无菌培养皿，每皿倒入15～20mL培养基（自然铺满整个底面为准），等凝固后备用。 四、实验步骤 四、实验步骤 5. 琼脂平板划线分离法 琼脂平板划线分离的方法一般有连续划线分离法和分区划线分离法。 （1）连续划线分离法（每人划1块营养琼脂平板） a.灭菌接种环，冷却后取适量混匀的菌液。 b.在培养基表面连续“之”字形划线，直至划完整个平板表面。 四、实验步骤 四、实验步骤 （2）分区划线分离法（每人划1块营养琼脂平板） a. 灭菌接种环。 b. 冷却后，蘸取少许混匀的菌液，划线于平板培养基表面a处。 c. 再将接种环灭菌。 d. 冷却后，从a处将菌划出至b处。 e. 接种环再次灭菌。 f. 从b处划出至c处。 g. 再次灭菌接种环。 h. 从c处划出至d处。 i. 将平皿倒置于37℃培养箱中培养24h后观察结果。 四、实验步骤 四、实验步骤 四、实验步骤 6. 稀释涂布法（每组稀释10-2，10-3，10-4稀释度菌液各涂布1块平板） （1）倒平板：电炉加热熔化其中一瓶60 mL营养琼脂培养基。待培养基冷却到50℃左右（用手抓瓶子不烫手）后，取3个无菌培养皿，每皿倒入15～20mL培养基（自然铺满整个底面为准），等凝固后备用。 （2）取4支装有9mL无菌生理盐水的试管，依次编号10-1，10-2，10-3，10-4，再取3个倒好营养琼脂培养基的平板，分别编号10-2，10-3，10-4 。 四、实验步骤 （3）稀释菌液。取1支无菌移液管，按无菌操作的方法吸取1mL菌液于10-1试管中。另取1支无菌移液管，在10-1中吹吸数次，混匀后吸取1mL菌液至10-2管中。另取1支无菌移液管，在10-2中吹吸数次，混匀后吸取1mL菌液至10-3管中。另取1支无菌移液管，在10-3中吹吸数次，混匀后吸取1mL菌液至10-4管中。（注意移液管不能混用） 四、实验步骤 （4）用无菌移液管分别吸取10-2，10-3，10-4三个稀释度的菌液各0.1mL，加入相应编号的营养琼脂平板中。（注意移液管不能混用） （5）用无菌涂布棒涂抹均匀。（涂抹不同稀释度菌液要用不同的涂布棒） （6）等菌液吸收进培养基后将平板倒置于37℃培养箱中培养24h后观察结果。 四、实验步骤 四、实验步骤 四、实验步骤 四、实验步骤 五、注意事项 六、思考题
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