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浅谈分光光度法-- 标准曲线的制作与应用 一.相关名称简介 二.标准曲线的制作 三.相关曲线及应用 边清鹏 16.05.01 一.相关名称简介 1 分光光度法 分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法。光区包括：紫外光区（200～400nm）、可见光区（400～760nm）、红外光区（0.8-100 um）。 一.相关名称简介 2 标准曲线定义 标准曲线是标准物质的物理/化学属性跟仪器响应之间的函数关系。建立标准曲线的目的是推导待测物质的理化属性。 在分析化学实验中，常用标准曲线进行定量分析，通常情况下的标准工作曲线是一条直线。 一.相关名称简介 3 坐标 标准曲线的横坐标(X)表示可以精确测量的变量(如标准溶液的浓度)，称为普通变量，纵坐标(Y)表示仪器的响应值(也称测量值，如吸光度、电极电位等)，称为随机变量。当X取值为X1， X2，…Xn时，仪器测得的Y值分别为Y1， Y2， …Yn。 一.相关名称简介 将这些测量点Xi， Yi描绘在坐标系中，用直尺绘出一条表示X与Y之间的直线线性关系，这就是常用的标准曲线制作方法。用作绘制标准曲线的标准物质，它的含量范围应包括试样中被测物质的含量，制作标准曲线实验点7个较好，不能任意延长。 一.相关名称简介 4 点分布 从不确定度理论推算样本的不确定度时，有二个重要的结论：一、标准曲线的重心点处，所查出来的样品不确定度最小。二、标准的点数越多，样品的不确定度越小。基于这两个结论的标准曲线的做法应该是：在样品浓度的附近尽量的多布标准点。 二.标准曲线的制作 1 标准曲线的表达式 标准曲线应是一条通过原点的直线 ，如果坐标上各浓度点基本在一条直线上可不进行回归处理 ，但在实验中不可避免地存在测定误差 ，往往会有一、二点偏离直线 ，此时可用最小二乘法进行回归分析 ， 然后绘制曲线 ，通常称为回归直线 ，而代表回 二.标准曲线的制作 归直线方程叫回归方程 ，表达式为 : y = kx + b (式中 : k为直线斜率， b为 y 轴上的截距 ， x 为被测溶液的浓度， y 为吸光度 ， 是多次测定结果的平均值 ) 。 2 标准曲线的参数 标准曲线有 3个参数 ， 即相关系数 r， 斜率 k和截距 b。 二.标准曲线的制作 2.1 相关系数 (r) :相关系数是表示变量 x 与 y 之间的线性关系的密切程度。如果 r = 1 则所有点都落在一条直线上， y 与 x完全呈现线性关系 ， 在分析中总存在随机误差， 一般， r≥0. 999。 2.2 斜率 (k) :某种分析方法的斜率在实验条件基本一致的情况下是相对稳定的 ，斜率是检验分析方法灵敏度的 ，因此当斜 二.标准曲线的制作 率出现异常数据 (超过相当偏差的2.5%)时 ，就要寻找原因。 2.3 截距 (b) :截距是评价标准曲线准确度的 ， 是实验误差在 y轴上 (或 x轴上 )的反映， 当用扣除空白值吸光度的数值为 y 值进行回归时 ， 理论上 b 值应为零 ， 但实际上截距等于零的情况是很罕见的 ， 当系统误差减至允许程度后， 随机误差总是存 二.标准曲线的制作 在的 ， 因此截距一般不为零。 3 影响标准曲线线性关系的因素 （1）分析法自身的精密度 （2）测定用仪器的精密度（3）易挥发的溶剂所引起的测定溶液浓度的改变（4）污染 （5）分析人员操作的影响 二.标准曲线的制作 玉米浆中溶磷标准曲线 二.标准曲线的制作 玉米浆中溶磷标准曲线 三.相关曲线及应用 总砷标准曲线制作 三.相关曲线及应用 总砷标准曲线应用表格 三.相关曲线及应用 1 实用性 这是做标准曲线的重要前提，这个问题实际很简单，就是这样一个问题：我的样品的仪器响应能否用我们所建立的标准曲线来推导其理化属性？答案建立在仪器响应的特异性和标准系列和样品的匹配性上面。一方面我们总是力求仪器 三.相关曲线及应用 1 实用性 的响应对于标准和样品是一视同仁；同时我们也要求我的样本跟标准基体匹配。所以最好的标准是基体匹配标准，最好的标准曲线是工作曲线。 三.相关曲线及应用 2 现实 现有方法趋向于标准曲线适用于较宽的样品浓度范围。在较宽的浓度跨度和有限的标准点的情况下，均匀的分布浓度点是最佳选择，这样对该标准曲线覆盖的浓度范围内，对于所有的浓度所提供的信息量都是相同的。奇数点的设置来 三.相关曲线及应用 源于相关信息，在已知该浓度范围先确定中间点，然后在中间点左右分布对称的标准曲线点，所以出来的总是奇数个点。正如强调，点多点少，最后影响的是标准曲线所查出样品理化属性的不确定度，不确定度是否符合要求呢，这就是在判断样品的结果是否超标或符合限值的时候有重要意义了。 Thanks!
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